機制研究
2019.08.19
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1、雙熒光素酶報告基因實驗:

?啟動子與轉錄因子相互作用檢測

?轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子,也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結合,這些特異性的序列被稱為順式因子。轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現相互結合,從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段。


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技術流程:




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應用領域:

潛在啟動子/啟動子核心區域檢測;

潛在增強子/抑制子等調控子核心元件檢測;

啟動子區可能的轉錄因子結合位點檢測;

啟動子/增強子與轉錄因子的相互作用;

病毒/細胞相互作用;

藥物等化學誘導因素對啟動子活性的調節(抑制或增強);

射線等物理誘導因素對啟動子活性的調節(抑制或增強)。

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? ? ? ? miRNA與3’UTR相互作用檢測

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? ? ?? 可提供含有熒光素酶報告基因的人、大鼠、小鼠的3' UTR靶標克隆,利用熒光素酶報告系統體外驗證miRNA潛在靶基因。miRNAs 與靶基因的3' UTR區域特異結合后調節靶基因的表達。當3' UTR靶標序列融合在一個熒光素酶報告基因下游并在體外表達時,miRNA通過與下游3' UTR特異結合從而調節熒光素酶的表達。最后,通過分析熒光素酶的活性,間接了解miRNA的靶標調控作用和特異性。


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2.?protein -protein互作

Co-IP(Co-Immunoprecipitation)基于抗體和抗原之間結合的專一性用于研究蛋白質相互作用的經典方法,是研究兩種蛋白在細胞內的相互作用方法。

基本原理是:細胞在非變性條件下裂解,胞內的蛋白通過抗體結合,以此為餌蛋白,免疫共沉淀調取與餌蛋白結合互作的靶標蛋白,洗脫得到蛋白產物,用于WB檢測驗證或MS(質譜)分析

技術原理:

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技術服務流程:

1.WB檢測餌蛋白的本底表達量(抗體特異性及效價檢測,以及本底餌蛋白的表達量測定)

2.細胞裂解,獲取裂解液

3.免疫共沉淀結合互作蛋白

4.純化獲取結合蛋白

5.WB檢測或 MS分析

服務優勢:

1.可為客戶定制服務,做融合表達(flag,tag,HA等),更加嚴謹驗證與探索細胞內生理狀態下的結合與互作,更具說服力

2.設定不同組別,包括Input組,目的組,陰性組,實驗嚴謹可靠

3.提供可直接用于文章的標準結果圖,以及實驗原圖結果

4.提供完善的實驗報告,更利于文章的撰寫和申請

適用研究:

1.細胞內轉錄因子與轉錄因子結合互作,形成復合物的調控模式

2.各種通路及代謝中,蛋白與蛋白的互作結合調控

客戶提供:

1.IP級別抗體(>30ug)及目的蛋白信息

2.活細胞:3-4*10^7

3.新鮮組織:組織量>0.3-0.5g

4.產物WB檢測的抗體(>5-10ug)

輝園苑提供:

1.所有實驗結果圖及原始圖片

2.完整實驗報告

3.可直接用于文章使用的處理結果圖

3. DNA/RNA-protein互作

1)ChIP實驗:

染色質免疫沉淀技術(Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP):是一種研究體內轉錄因子與基因組DNA之間互作結合的方法?;驹硎腔罴毎麪顟B下,通過多聚甲醛固定,形成蛋白-DNA復合物,運用超聲(或酶解)方法對染色體隨機剪切至一定長度范圍,通過免疫共沉淀富集結合,純化獲取轉錄因子蛋白所結合的啟動子區域片段,后續產物可用于Q-PCR檢測驗證或測序分析。

技術原理:

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技術服務流程:

1.細胞交聯固定:多聚甲醛固定活細胞(或組織)

2.核質分離:提取細胞核,獲取染色質

3.超聲破碎:超聲斷裂染色質,獲取一定范圍長度的片段

4.免疫共沉淀:獲取DNA與蛋白結合的特定復合物

5.解交聯:解除DNA與蛋白的交聯狀態,純化獲取DNA產物

6.Q-PCR檢測或建庫測序

服務優勢:

1.生物信息學方法,預測轉錄因子蛋白結合的啟動子基因,以及預測結合的特定motif,為客戶提供多選擇信息

2.直接尋找轉錄因子結合的編碼區上游靶基因,精準定位調控基因

3.設置完整組別,包括Input組,陽性組,對照組,陰性組,實驗更加嚴謹可靠

4.提供可直接用于文章的標準結果圖,以及實驗原圖結果

5.提供完善的實驗報告,更利于文章的撰寫和申請

適用研究:

1.適用于人,大鼠,小鼠等哺乳動物細胞的研究,探討與驗證體內轉錄因子蛋白調控啟動子的關系

2.適用于臨床各種組織樣品的探討研究,例:癌組織與癌旁組織,通過ChIP實驗獲取得到的樣品產物DNA,建庫測序獲取調控的啟動子基因

客戶提供:

1.IP或ChIP級抗體,抗體量>20ug

2.活細胞:1-2*10^7

3.新鮮組織:組織量>0.1-0.3g

4.驗證基因信息

輝園苑提供:

1.WB檢測抗體效價與特異性結果圖

2.染色體斷裂圖

3.完整實驗報告

4.可直接用于文章使用的處理結果圖


2)RIP

RIP(RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA結合蛋白免疫沉淀)實驗技術是一種研究細胞內RNA與蛋白的結合互作實驗技術,在表觀上研究的是轉錄后的調控技術?;驹硎沁\用靶蛋白的抗體,將蛋白與結合的RNA復合物調取獲得,后續純化得到RNA,用于Q-PCR檢測或高通量測序分析,驗證預測結合的靶標RNA或探索結合調控的標志物RNA分子

技術原理:

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技術服務流程:

1.細胞裂解,獲取裂解液

2.抗體與磁珠結合孵育,形成磁珠-抗體復合物

3.磁珠抗體復合物與裂解液孵育結合,捕獲蛋白結合的RNA

4.純化獲取得到產物RNA

5.Q-PCR檢測驗證或高通量測序篩選靶標分子

服務優勢:

1.生物信息學預測蛋白結合的序列,對蛋白結合互作的RNA分子進行檢測和驗證,可為客戶提供深度研究,探討RBP結合的RNA motif

2.設置完整組別,包括Input組,陽性組,對照組,陰性組,實驗更加嚴謹可靠

3.提供可直接用于文章的標準結果圖,以及實驗原圖結果

4.提供完善的實驗報告,更利于文章的撰寫和申請

適用研究:

1.適用于人,大鼠,小鼠等哺乳動物的研究,探討與驗證體內蛋白與RNA結合互作轉錄后調控研究

2.適用于各種RNA的研究,如:mRNA,LncRNA,miRNA,circle RNA等

3.適用于臨床各種組織標本的探討研究,例:癌組織與癌旁組織,通過RIP(AG02)實驗獲取得到的樣品產物RNA,高通量測序,篩選靶標分子或分子標志物

客戶提供:

1.IP或ChIP級抗體,抗體量>20ug

2.活細胞:8-9*10^7

3.新鮮組織:組織量>1-3g

4.驗證基因信息

輝園苑提供:

1.WB檢測抗體效價與特異性結果圖

2.完整實驗報告

3.可直接用于文章使用的處理結果圖


3)RNA pull down?

RNA pull down 是一種研究RNA與蛋白結合互作的實驗技術方法,生物體內許多功能的核心是RNA與蛋白的結合來進行調控,如:蛋白的合成,mRNA的組裝,細胞發育調控等?;驹硎牵和ㄟ^體外轉錄獲取標記的RNA作為探針,與細胞細胞裂解液孵育,免疫共沉淀的方法獲取RNA結合捕獲的蛋白,后續可通過WB檢測驗證結合蛋白,或通過質譜(MS)的方法得到結合蛋白的信息

技術原理:

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技術服務流程:

1.克隆載體的構建

2.體外轉錄形成標記的RNA探針

3.探針與裂解液孵育結合,形成磁珠-RNA-蛋白復合物

4.純化獲取蛋白產物

5.WB檢測或MS分析

服務優勢:

1.生物信息學預測,分析RNA motif與蛋白的結合,可通過截斷與截短的方式研究結合的序列信息,為客戶提供深度分析和研究方案

2.設置完整組別,包括Input組,正義鏈組,反義鏈組,陰性組,實驗更加嚴謹可靠

3.提供可直接用于文章的標準結果圖,以及實驗原圖結果

4.提供完善的實驗報告,更利于文章的撰寫和申請

適用研究:

各種通路,代謝路徑,分子機制,細胞調控,藥物誘導等方向的調控研究,尋找或驗證RNA結合的蛋白,如:結合蛋白為某些轉錄因子,代謝過程中的核心酶,通路中的調控蛋白等

客戶提供:

1.基因信息及轉錄本信息(或含目的基因的載體)

2.活細胞:3-4*10^7

3.新鮮組織:組織量>0.3-0.5g

4.產物WB檢測的抗體(>5-10ug)

輝園苑提供:

1.體外轉錄檢測圖,產物銀染膠圖

2.完整實驗報告

3.可直接用于文章使用的處理結果圖

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