穩定細胞株構建
2019.10.15
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1.原理:

? ? ? ?將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體通過慢病毒包裝被感染到宿主細胞并整合到宿主染色體中,用載體中所含抗性基因進行篩選。得到可穩定表達目的蛋白,或者穩定表達沉默特定基因的細胞株。

? ? ? ?shRNA細胞株構建原理:短發卡RNA(shRNA)是可以克隆到表達載體并表達短的干擾RNA(sIrna,19-21個核苷酸的RNA雙鏈)的DNA分子。我們可根據靶標設計短發卡RNA(shRNA)序列并將其克隆島特定載體上。短發夾RNA是設計為能夠形成發夾結構的非編碼小RNA分子,可通過RNA干擾來抑制基因的表達。

過表達細胞株構建原理:通過人工構建的方式在目的基因上游加入調控元件,使基因可以在人為控制的條件下實現大量轉錄和翻譯,從而實現基因產物的過表達。

? ? ? ?KO細胞株構建原理:基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術,是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理,用設計的同源片段替代靶基因片段,從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展,除了同源重組外,新的原理和技術也逐漸被應用,比較成功的有基因的插入突變和iRNA,它們同樣可以達到基因敲除的目的。

2.技術應用

? ? ? ? 需要長期觀察外源基因表達的作用,進行長期藥理學研究、基因治療研究、遺傳調控機制研究或需要進行大規模蛋白合成則需要構建穩轉株。

3.實驗流程:


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4.結果展示:



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DU145細胞熒光圖? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? SW480細胞熒光圖



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